oligomismatch mutagenesis

Олигонуклеотид-направленный мутагенез, м.ошибочного спаривания нуклеотидов — техника (метод) введения сайт-специфических мутаций (см. Сайт-специфический мутагенез) в молекулу ДНК путем отжига (присоединения) специально синтезированных олигодезоксинуклеотидов (от 7 до 20). Олигонуклеотиды должны быть комплементарны участку, который мутируется, за исключением одного или нескольких оснований. После их гибридизации с денатурированной ДНК-мишенью (обычно вставленной в клонирующий вектор дикого типа) с помощью фрагмента Кленова (см. Кленова фрагмент) синтезируется полная комплементарная нить. При этом в качестве праймера используется образовавшийся после гибридизации двунитчатый участок ДНК. Сформировавшаяся двунитчатая молекула ДНК переносится в E. coli, где ДНК претерпевает процесс репарации ошибок спаривания нуклеотидов. В результате образуется смесь молекул, в которой 50% нитей ДНК являются нормальными (т. е. дикого типа), а 50% несут ошибочные (неправильные) нуклеотиды, содержавшиеся в праймере, т. е. являются специфически мутировавшими клонами.